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        产品资料
        • _username: 禽流感病毒H5亚型RT-PCR检测试剂盒
        • ode: 080018075
        • 批准文号: 兽药生字(2006)080018075
        • 规格包装: 20份/盒。
        • 作用用途: 用于H5亚型禽流感病毒的检测。

        【兽药名称】

             通用名 禽流感病毒H5亚型RT-PCR检测试剂盒

             商品名 无

            英文名 Avian Influenza Virus H5 Subtype RT-PCR Detection kit

            汉语拼音 Qinliugan Bingdu H5yaxing RT-PCR Jianceshijihe

        【主要成分与含量】

             变性液6mL×1瓶、酚/氯仿/异戊醇混合液6mL×1瓶、异丙醇9mL×1瓶、75%乙醇10mL×2瓶、DEPC水500µl×1管、2mol/L醋酸钠溶液(pH值4.0)700µl×1管、阳性对照100µl×1管、阴性对照100µl×1管、RT-PCR反应体系22.5µl×22管、6倍上样缓冲液 100µl×1管、扩增对照30µl×1管。

        【作用与用途】

            用于H5亚型禽流感病毒的检测。适用于可能感染H5亚型禽流感病毒的咽喉拭子、泄殖腔拭子、组织、鸡胚尿囊液以及细胞培养物中H5亚型禽流感病毒RNA的检测。

        【用法与判定】

            1   取1.5mL DEPC处理过的离心管,加入待检样品100µl,加300µl变性液,继续加入30µl 2mol/L醋酸钠(pH值4.0)。反复颠倒离心管4~5次,以混合均匀。

            2   加入酚/氯仿/异戊醇混合液300µl,反复颠倒离心管3~5次,再摇晃10秒,置冰上静置15分钟。

            3   4℃ 12000r/min离心20分钟,吸取上清置另一个离心管中。

            4   加入等体积的异丙醇,-20℃静置10~15分钟,沉淀RNA。

            5   4℃ 12000r/min离心10分钟。弃上清,加入75%的冰乙醇,温和地反复颠倒离心管3~5次。

           6   4℃ 12000r/min离心5分钟。弃上清,用滤纸吸干管壁余液,真空抽干或者37℃烘干5~20分钟。

           7   加入10µl DEPC水,溶解RNA。

            8   取2.5µl RNA转移到RT-PCR反应体系管中。

            9   置于PCR仪中,循环参数为45℃逆转录45分钟,94℃ 预变性2分钟,94℃ 30秒、52℃ 45秒、68℃ 45秒,35个循环,最后68℃延伸8分钟。

           10   取5µl PCR产物,混合1µl 上样缓冲液,1.0%的琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。以DNA分子量Marker为参考。

            11   结果判定,同时出现372bp和229bp大小的扩增片段时,判定为H5血凝素亚型禽流感病毒阳性,只出现229bp片段判定为其它亚型A型流感病毒阳性,只出现372bp定为H5亚型疑似,不出条带,判定为阴性。

        【注意事项】

           (1)本试剂盒RNA提取液2~8℃存放;RT-PCR反应体系-20℃以下存放。尽量不要反复冻融。

           (2)RT-PCR反应体系,用前要先在冰上彻底溶化,并瞬时离心将液体甩至管底。

           (3)病料的处理很重要,现地采集的病料,先进行研磨,再按照每克重量加入1mL PBS,混匀,按10-1~10-2比例稀释后用于RNA的提取。棉拭子病料直接加入1mL PBS,混合后取溶液用于RNA的提取,不需要稀释。

            (4)RNA的提取直接会影响到RT-PCR结果,需要特别注意RNA提取过程的操作。

           (5)注意废弃物的无害化处理。可疑待检样品及其接触过器材要消毒灭菌,防止实验室散毒;含有EB的物品需要高温处理。

           (6)注意防止PCR操作过程中的环境污染,有条件情况下可以采用独立房间分别进行RNA提取、RT-PCR、电泳等操作环节,无条件时应该尽可能划分不同功能的工作区,并且电泳时采用单独移液器。

        【废弃包装处理措施】

             剩余的试剂及空瓶不能随意丢弃,须经加热或消毒灭菌后方可废弃。

        【规格】

            20份/盒。

        【贮藏与有效期】

             RNA提取试剂置2~8℃保存;RT-PCR反应体系置-20℃以下保存。有效期6个月。

        【批准文号】

            兽药生字(2006)080018075

        【生产企业】

        哈尔滨维科生物技术开发公司 

        仅供兽医诊断使用

        哈尔滨维科生物技术开发公司

        地  址:哈尔滨市香坊区哈平路680号 邮  编:150069

        销售热线:0451-51661115/51661116 服务热线:0451-51661188

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